本篇文章给大家谈谈分子生物学实验技术,以及什么是分子实验对应的知识点,文章可能有点长,但是希望大家可以阅读完,增长自己的知识,最重要的是希望对各位有所帮助,可以解决了您的问题,不要忘了收藏本站喔。本文目录分子细胞生物学的三个实验什么是分子实验分子生物学实验包括哪些实验分子生物学实验有多难分子生物学的研究方法有哪些分子细
本篇文章给大家谈谈分子生物学实验技术,以及什么是分子实验对应的知识点,文章可能有点长,但是希望大家可以阅读完,增长自己的知识,最重要的是希望对各位有所帮助,可以解决了您的问题,不要忘了收藏本站喔。
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分子细胞生物学的三个实验
包含了生物大分子制备和分析常用技术、蛋白质与核酸的提取与分离、PCR技术、分子杂交与印迹技术、分子克隆技术、外源基因转移技术、蛋白质表达技术、分子标记技术、分子改造技术、测序及人工合成技术、基因组学技术、蛋白质组学技术、生物芯片技术、生物信息学技术、RNA研究技术等.
什么是分子实验
从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递,基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能,以及细胞信号的转导等。
分子生物学中最基本的技术是蛋白质的表达和纯化。首先是编码目的蛋白的DNA序列被克隆(用PCR技术和限制性内切酶)到作为表达载体的质粒中。随后构建好的质粒被引入到宿主细胞。编码序列在质粒上的特殊的启动子元件的驱动下,被宿主细胞的表达系统所表达。质粒上通常还带有抗生素抗性标签以便于质粒筛选。
分子生物学实验包括哪些实验
离心技术:
是分离纯化蛋白质、酶、核酸(DNA、RNA)、细胞的最常用方法之一。
电泳(electrophoresis):带电粒子在电场中向着与其所带电荷相反方向电极移动的现象。
可用于分离不同分子量的生物大分子。
1.蛋白质的电泳:
用途:蛋白质的定量。
2.核酸的电泳:
用途:用于核酸的分离、鉴定、纯化、回收。
比如:我只需要长度300bp左右的分子。那么,电泳后,在切胶过程中,只切300bp处的分子即可。
蛋白质研究相关的技术:
1.含量测定:
2.结构的测定:
(1)一级结构的测定:搞清楚蛋白质肽链的氨基酸排列顺序。
方法:Edman降解法、质谱法(MS,将蛋白水解,多肽链分成小段。检测肽段)
(2)空间结构测定:蛋白空间结构分析比一级结构分析复杂得多。
方法:X射线衍射晶体分析法、核磁共振法等。
3.功能的测定:
(1)酵母双杂交(YTH):
假设:欲检测蛋白X与蛋白Y是否相互作用。
检测方法:
将蛋白X与报告基因转录因子的BD融合;
将蛋白Y与AD融合;
确认蛋白X与蛋白Y形成的复合体能否激活报告基因的表达。如果能激活报告基因的表达,说明:X与Y形成了复合体,则BD和AD靠近,激活了下游报告基因的表达;反之,报告基因不表达。
原理:
真核生物的转录因子(尤其是酵母转录因子GAL4),包括两个彼此分离、但功能必需的结构域:一个是与DNA结合的结构域-BD;一个是转录激活域-AD。BD识别转录因子效应基因的上游序列并与之结合;AD通过与转录复合体的其他成分作用,启动下游的基因转录。
即使BD与AD分开,但如果在空间上较为接近时也能激活转录。——利用转录因子的BD、AD这一特性,通过检测转录因子是否启动了其效应基因的表达,可研究蛋白质X与Y是否相互作用。
(2)蛋白质芯片技术:一种高通量、微型化、自动化的蛋白质分析技术。一次试验中可同时检测几百甚至几千种目标蛋白或多肽。
(3)免疫印迹技术Westernblotting:利用抗原抗体特异反应的原理。
用途:检测样品中特定蛋白质是否存在以及半定量分析、研究蛋白质间的相互作用。
分子生物学实验有多难
对于分子生物学我个人觉得还是理论课比较重要的,而且我们老师之前就说过,在实验中,如果你的理论知识不够强大的话,因为分子生物都是肉眼不能看见的变化过程,一般结果都是只有最后才能知道,也就是说,你耗时很久很久做完实验发现之前不知道哪一步做错了,最后功亏一篑,这时候如果你还不知道理论方面的知识,那么基本上连哪一步做错都不知道,无法分析的话,实验还是很难继续做下去的。
我个人觉得,对于分子生物学实验来说,PCR技术无疑是最重要的,我的专业不是纯粹的生物学,但是分子生物学是基础学科,而对于这门课来说,我们做的最重要,老师讲解的最细致的一个实验就是PCR了。
大概来讲解一下这个实验吧,对于我这种专业,我做的是大肠杆菌的PCR,学生物的都知道PCR是什么,我就不多说了,现在实验室的主要仪器就是PCR仪,但是之前的提取过程也是很重要的,我之前做实验有一次的一个样品就是没提取好,最后什么都没有,同时试样过程中的各种试剂、各种用量都非常精细,很多试剂都是无色透明的,一定要细致,把各种试剂的使用量、添加顺序都按实验指导做好,中间的最核心的部分一本都是PCR仪做的,所以还好,一般也不会出什么错,之后还要跑个电泳,跑电泳还是比较简单啦,现在也有各种各样的不同的技术。
综合来说,分子生物实验就是一定!一定!要细心!这种微量又容易出现意外状况的实验一定要细心,这也就是分子生物最大的难点和重点了吧。
分子生物学的研究方法有哪些
分子生物学的研究方法有基因操作技术,克隆载体,基因文库,克隆DNA分析,基因操作技术。
分子生物学是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科,它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象,是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会,也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。
好了,文章到此结束,希望可以帮助到大家。
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